دسته بندی | شیمی |
فرمت فایل | ppt |
حجم فایل | 991 کیلو بایت |
تعداد صفحات فایل | 119 |
کاربرد اسپکترو فتو متری در بیو شیمی
1 – اسپکتروفتومتری
بوسیله اسپکتروفتومتر شدت رنگ محلولها را با دقت اندازه گیری می کنند.
دستگاههائی که برای رنگ سنجی به کار برده می شوند الکتروفتومترو یا اسپکتروفتومتر نامیده می شوند.
شمای ساده زیر قسمتهای مختلف یک الکتروفتومتر را نشان می دهد.
بطور کلی هر اسپکتروفتومتر:
• یک منبع نورانی،
•یک وسیله ایجاد نور تکرنگ با طول موج مشخص
• یک سلول یا لوله مخصوص برای جادادن محلول رنگی
•، یک سلول فتوالکتریک و یک گالوانومتر دارد.
اندازه گیری غلظت یک محلول
به دو روش می توان غلظت یک محلول را اندازه گیری کرد:
الف) از راه اندازه گیری نوری که از محلول رنگی خارج می شود و
به آن ،Transmitance ،یا عبور می گویند؛
ب) اندازه گیری مقدار نوری که جذب محلول رنگی می شود و به آن دانسیته اپتیک (OPTICAL DENSITY) O.D یا آبسوربنس می گویند.
الف) دانسیته اپتیک یا آبسوربنس
نوری که از یک محلول رنگی عبور می کند مقداری از آن جذب محلول رنگی می شود .
اگر Io شدت نور اولیه و I شدت نور خارج شده از محلول باشد بنابراین I a شدت نوری است که جذب محلول رنگی گردیده است.
Ia= I - Io
Log Io - log I =OD = Absorbanc
logI/I0=OD
(1) log I0/I=OD
جذب از دو قانون پیروی می کند:
مطابق قانون بیرولامبرت (BEER & LAMBERT) هنگامیکه نور یک رنگ از محلول رنگی عبور میکند مقدار نوری که به وسیله محلول جذب می شود ویا مقدار نوری که از محلول خارج می شود؛
به غلظت ماده رنگی موجود در محلول
به ضخامت لوله ایکه نور از آن عبور کرده بستگی دارد گردد.یعنی:
OD=KCL= جذب
دسته بندی | فنی و مهندسی |
فرمت فایل | doc |
حجم فایل | 35 کیلو بایت |
تعداد صفحات فایل | 5 |
اسپکتروفتومتری
تعریف اسپکتروفتومتری:
اسپکتروفتومتری یک روش تجزیه دستگاهی است که در آن تابش الکترومغناطیسی در ناحیه مرئی و ماورا بنفش جذب ماده میشود، و از روی شدت جذب مقدار ماده تعیین میشود.
1- منبع تابش: نور سفید
2- محل نمونه: نمونۀ گازی، جامد، مایع
3- تجزیهگر: منشور، یا شبکه
4- آشکارساز:
5- ثبات:
قسمتهای مختلف دستگاه اسپکتروفتومتر
1- منابع تابش معمولی در اسپکتروفتومتری
- لامپ تنگستن برای ناحیه مرئی 340-1000nm (Visible)
- لامپ دتریوم برای ناحیه ماورا بنفش (Uv) 190-370nm
2- منوکروماتور
- منشور
- شبکه
3- سل یا محل نمونه
- شیشه و پلاستیک برای ناحیه مرئی
- کوارتز برای ناحیه ماورابنفش
4- آشکارساز
- فتوتیوب
- فتومالتی پلایر (PMT)
5- ثبات
- نشانگرهای عقربه دار
- نشانگرهای دیجیتالی
ـ مانیتور
قانون بیر لامبرت: Beer-Lambert or Bouguer-Beer
شدت نور (اشعه الکترومغناطیسی) جذب شده متناسب با غلظت ماده و طول سل (مسیری که نور می پیماید) دارد.
جذب تابش
(%T) عبور(درصد عبور)
:e ضریب جذبی مولی ضخامت سل (طول مسیر عبور اشعه الکترو مغناطیس)
C: غلظت mol.L-1
طرز تعیین غلظت یک ماده توسط اسپکتروفتومتری
1ـ تهیه محلول بلانک (یا محلولی که دارای تمامی گونهها بغیر از گونه مورد نظراست)
2ـ تهیه نمونههای استاندارد از گونه موردنظر با غلظتهای مشخص
3ـ قرائت جذب محلولهای استاندارد
4ـ رسم جذب برحسب غلظتهای استاندارد و بدست آوردن نمودار کالیبراسیون
دسته بندی | علوم آزمایشگاهی |
فرمت فایل | docx |
حجم فایل | 360 کیلو بایت |
تعداد صفحات فایل | 35 |
اسپکتروفتومتر یا طیف سنج یک دستگاه آزمایشگاهی اولیه است که جهت خواندن نتایج آزمایشهایی که واکنش آنها از نوع End point هستند به کار میرود. این دستگاه میزان جذب یا عبور طول موجهای مشخصی از انرژی تابشی (نور) از یک محلول را اندازه گیری میکند بیشترین کاربرد آن در آزمایشگاه، در بخش بیوشیمی است.اساس کار اسپکتروفتومتر همانند بسیاری از دستگاههای آزمایشگاهی، بر اندازه گیری میزان نور جذب شده توسط یک محلول رنگی است که طبق قانون بیر-لامبرت میزان جذب نور (OD) متناسب با غلظت ماده حل شده در محلول است.
روشهای طیف سنجی براساس بر هم کنش تابش الکترومغناطیسی با ماده بنیان گذاری شده است و چون امواج الکترومغناطیس، حاصل کاهش سرعت ذرات با بار الکتریکی است بنابراین توسط ماده جذب شده و سبب افزایش سرعت ذرات میگردد. علاوه بر این انرژی نورانی در بر هم کنش با ماده و جذب آن توسط ماده، باعث برانگیختن ماده به ترازهای انرژی بالاتر میگردد. بنابراین بسته به شدت و قدرت انرژی وارده به ذره با ماده بر هم کنش کرده و پدیده خاصی را سبب میگردد که اساس اندازه گیریهایی نظیر اسپکتروفتومتری را تشکیل میدهد. و میتواند شامل کلیه نواحی طیف الکترومغناطیس از اشعه گاما و ناحیه مریی تا امواج رادیویی باشد.